發(fā)布日期:2022-02-25 來源:GM
1.服務(wù)介紹
腺病毒感染范圍廣,幾乎可以感染所有細(xì)胞系、原代細(xì)胞和部分組織。感染效率高達(dá)100%,可全面超越其它病毒載體工具和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。 腺病毒(Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復(fù)制不依賴于宿主細(xì)胞的分離。有近50個血清型,大多數(shù)Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉(zhuǎn)基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達(dá)E1和E3基因的細(xì)胞中復(fù)制,因此是一種適用于治療的高??刂葡到y(tǒng)。
2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示
293細(xì)胞腺病毒P2代 白光視野(200x)
293細(xì)胞腺病毒P2代 熒光視野(200x)
3.實(shí)驗(yàn)流程
接種293細(xì)胞——培養(yǎng)12h,密度70%,病毒包裝——6h后換液——24h-48h后,鏡下觀察熒光,病毒收集,-80℃和37℃反復(fù)凍融3次——病毒感染293細(xì)胞,連續(xù)進(jìn)行三代感染。
4.注意事項(xiàng)
⑴病毒收集時,注意個人防護(hù),及實(shí)驗(yàn)過程中用到培養(yǎng)瓶等消毒處理;
⑵病毒轉(zhuǎn)染后,可以通過顯微鏡下觀察熒光初步判斷病毒是否包裝成功;
⑶37℃融化時一旦病毒融化就馬上取出,長時間在37℃溫育會降低病毒滴度,完全融化后可以劇烈震蕩30s,凍融周期通常會持續(xù)2~4次才可以獲得高滴度的病毒。
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